Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) de Dos Rondas con Reamplificación Desde gel para Detectar Dirofilaria Immitis en Perros de el Oro, Ecuador
DOI:
https://doi.org/10.70747/cr.v5i1.851Palavras-chave:
dirofilaria immitis, perros, PCR convencional, diagnóstico molecular, secuenciaciónResumo
La dirofilariosis cardiopulmonar por Dirofilaria immitis es una zoonosis transmitida por mosquitos que afecta a perros en regiones tropicales; su diagnóstico exige integrar pruebas serológicas y moleculares para evitar sobre- o subestimaciones. Este estudio tuvo como objetivo detectar molecularmente D. immitis en perros de la provincia de El Oro (Ecuador) mediante PCR punto final del gen COI y confirmar la identidad por secuenciación, incorporando una ruta de re-amplificación cuando aparecieron dímeros o bandas inespecíficas. Se realizó un estudio observacional, descriptivo y transversal con enfoque cuantitativo en 40 caninos con signos compatibles, evaluados mediante inmunocromatografía (IC); los IC positivos se retestearon y pasaron a PCR (amplicón ~150 pb). Cuando la primera ronda mostró perfiles subóptimos, purificamos la banda específica en gel y realizamos una segunda PCR con los mismos cebadores (dos rondas, no anidada). Los productos positivos se secuenciaron en doble dirección. La IC fue positiva en 24/40 (60,0%). La PCR confirmó D. immitis en 10/24 IC+ (41,7%) y no detectó en 14/24 (58,3%). La positividad por PCR se concentró en Machala (6 casos), seguida de Santa Rosa (3 casos) y Huaquillas (1 caso). El análisis estadístico sugirió diferencias en la distribución de casos positivos entre cantones (χ² = 15,27; p = 0,00048); sin embargo, este hallazgo debe interpretarse con cautela debido al tamaño muestral limitado y a la distribución desigual de la muestra entre jurisdicciones. La re-amplificación desde banda purificada resolvió dímeros/inespecificidad y permitió obtener amplicones aptos para secuenciación. Concluimos que la serología aislada sobreestima la ocurrencia; la PCR con re-amplificación incrementa la especificidad y la certeza diagnóstica. Un algoritmo escalonado (IC + microfilarias → PCR con re-amplificación cuando aplique → secuenciación) optimiza el diagnóstico y la vigilancia de la dirofilariosis canina en El Oro
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